分子生物學研究對提取RNA要求較高，純度高、完整性好、含量高的RNA是獲得實驗成功的關鍵和前提。小編給各位小伙伴總結了以下RNA提取常見問題及RNA質量的評估方法：
常見的RNA提取方法有異硫氰酸胍-苯酚法（Trizol法）、離心柱法和磁珠法。Trizol法是動物組織及動物細胞總RNA提取常用的方法。Trizol法裂解能力較強，尤其適合小樣本及特別難提取的組織，如皮膚，動物結締組織等總RNA的提取；另外Trizol作為一種通用型的裂解試劑，還可以用于植物組織、細菌、真菌等組織的提取。離心柱法是一種十分穩(wěn)定的RNA提取方法，電泳條帶較為均一，但分子量較小的RNA會被過濾掉。磁珠法是使RNA與納米磁珠結合，在磁場作用下，磁珠-核酸復合物與液體分離，再把核酸從磁珠上洗脫下來。對于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進行總RNA的提取。那么在RNA提取過程中如何防止RNA降解，保證RNA質量？
如何避免RNA降解？
1.避免RNA酶的產生：
A 、避免內源性RNAase：
內源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因。收集樣本時，內源性RNA酶釋放，降解RNA，降解速度與酶含量和溫度有關，所以收集樣本時必須馬上進行內源RNA酶的失活。內源性RNAase失活方法：①迅速研磨破碎后加入裂解液中保存；②立即切成小塊投入液氮中保存；③使用RNAlater保護劑等。
B、避免外源性RNAase：
使用無RNase的塑料制品和槍頭，玻璃器皿要消毒避免交叉污染，注意：戴帽子、戴口罩、橡膠無菌手套，在清潔灰塵少的試驗臺提取。
2.提高RNA提取效率：
A 、組織RNA提取：
選用新鮮組織，這樣RNA提取的效果比較好；如果不是新鮮的(最好在半年之內，-80℃或者液氮中凍存的)組織，注意不要反復凍融，從冰凍狀態(tài)拿到0-4℃，待組織解凍后，用DEPC泡過的剪刀剪一小塊組織，稱重后，放到預冷的勻漿器中，進行勻漿處理。注意：速度不要太快，要有間隙，否則由于摩擦產熱，RNA遇熱會加速降解。如果一次做多個標本的RNA提取，也要這樣做，更不能急。后面的步驟和細胞RNA提取一樣。
B、培養(yǎng)細胞的RNA提取：
貼壁細胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到離心管中，離心，去上清然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。懸浮細胞，直接用吸管或者加樣槍吹打，以使細胞基本可以被吹下來。然后離心去上清，不需要用PBS洗。
如何確認RNA質量的好壞?
1. RNA溶液純度的檢測：
RNA溶液在280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般我們通過OD260/OD280的值來判斷RNA純度：
OD260/280的值在1.9-2.1之間，認為RNA純度較好；
OD260/280的值小于1.8時，表明蛋白質雜質較多；
OD260/280的值大于2.2時，表明RNA已經降解；
注意：如果用TE溶液洗脫RNA，會使OD260/280的值偏大。
