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NanoDrop 2000-Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計是NanoDrop的產品，應用液體的表面張力特性，樣品體積只需要0.5~2ul，在檢測臺上，經上下臂的接觸拉出固定的光徑達到快速、微量、高濃度、免石英管、免毛細管等耗材檢測吸收值的優點。此產品設計受保護，并在全普遍廣受歡迎，其準確度與便利性讓科學家得以更有效率進行各項研究。

Thermo NanoDrop 2000紫外分光光度計使用高能量氙燈（pulsed xenon flash lamp）可提供190~840nm的全光譜檢測，且不需要暖機，開機后立即使用。搭配高感度CCD array檢測器，檢測吸收值可高達300Abs（dsDNA濃度2~15000ng/ul），大部分純化后的核酸幾乎都不需要稀釋即可檢測。

      待測樣品的均質性是NanoDrop 2000的較為高要求，一般核酸、蛋白質樣品能在檢測前以vortex mixer震勻為較為勻，若無vortex mixer也應以pipette吸放數次混勻。若擔心genomic DNA可能因前述動作而斷裂，則改以55?C加熱約一分鐘，使樣品在偵測前呈現均勻狀態，以確保 2ul 具有代表性。

     檢測時選擇不同檢測模式，可以得到較為快速的結果：
● Nucleic Acid – 吸收光譜、230nm, 260nm, 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio、260/230 ratio及核酸濃度。

● UV-Vis – 190~840nm間所有波長的吸收值及光譜（以1mm光徑吸收值呈現）。

● A280蛋白質定量法 – 280nm吸收值（換算成10mm光徑吸收值）、260/280 ratio及蛋白質濃度。僅適用于純化后的蛋白質，須具有已知的質量消光系數（mass extinction coefficient）方可計算。

● BCA、Bradford及Lowry – 依不同呈色劑提供不同波長吸收值結果，自動畫出標準曲線并計算R square，待測蛋白質濃度。

* 蛋白質檢測模式目前提供BCA、Bradford及Lowry三種常見定量呈色劑，因呈色劑隨時間會逐漸加深，使用前請詳閱試劑說明書并制備不同濃度的標準品，在較為快時間內完成檢測，以得到良好的標準曲線。每個標準曲線較為多可有七個標準品，每個標準品較為多可做五重復。

* 測蛋白質時樣品體積需使用 2ul，每個樣品檢測后需以Kimwipes 低塵擦拭紙（編號： 34155 ）擦拭15~20回，以避免呈色劑與蛋白質的殘留。

濃度范圍：

NanoDrop　ND-2000C

產品描述：

NanoDrop　ND-2000C為NanoDrop　ND-2000的升級版本，ND-2000C具有ND-2000全部功能，除此之外，它還有以下突出特點：

1、檢測耗時更短，僅需3秒鐘；

2、具比色杯或者檢測孔兩種選擇，適合檢測各種類型的樣本，包括易揮發性物質的檢測；

3、檢測范圍更加寬泛，檢測下限可低至0.4 ng/μl （dsDNA）；

4、內置比色杯，可進行實時動力學曲線研究，或者OD600細胞濃度的測量。

ND-2000C技術參數：

檢測孔測量時:

  1、波長范圍: 190-840nm；

  2、波長精度: 1nm；

3、分辨率:<1.8 nm （FWHM at Hg 253.7 nm）；

  4、其它: 1mm光程長度（可自動調整到0.05mm）；

  5、檢測下限：2ng/μl（dsDNA）；

  6、檢測上限：15000ng/μl（dsDNA）；

  7、吸光率度：0.002 absorbance （1mm光程）；

  8、吸光率準確性：2%（at 0.76 at 257 nm）；

  9、吸光率范圍：0.02-300 （相當于10mm光程）；

  10、核酸檢測周期：< 5s；

  11、體積：14cm×20cm。

比色杯測量時：

1、光柱高度：8.5 mm；

2、控溫，37 ± 0.5 °C；

3、攪拌速度: 150 – 850 rpm;

4、四種光徑可供選擇，分別為1，2，5，10mm；

5、吸光率范圍：0.002 – 1.5；

6、檢測下限：0.4 ng/μl （dsDNA）；

7、檢測上限：750 ng/μl （dsDNA）；

8、檢測時間：< 3 s；

9、重量：2.1 kg.

二、使用方法舉例

dsDNA：
在主畫面點選Nucleic Acid，電腦與儀器自動完成連線。依照DNA所溶於之液體準備該溶液（務必確認DNA溶於二次水、TE buffer或哪一組kit的elution buffer）取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂後再按Blank。在右上方拉選Sample Type 選 DNA-50，在Sample ID位置輸入樣品名稱，將樣品混勻，取出1.5 ul 點在偵測臺上，放下上臂後再按Measure。點此觀看操作影片。

結果：
DNA濃度即以 9.691 x 50 = 484.5 算出。 260/280介於1.8~2.0通常代表此為較純的DNA（隨DNA組成不同會有差異）。 260/230高於260/280，介於1.8~2.2通常表示純化過程殘留污染物較少。若欲察看220~340nm間其他波長的吸收值，可使用滑鼠拉動位於230nm的直線，或在右邊λ處輸入其他波長數值。

三、結果整理：
NanoDrop2000 軟體在偵測一開始會詢問檔案欲存至何處，若未，則檔案會存在上一個使用者的檔案內。點此觀看或下載 Data 功能使用說明。

四、注意事項：
1. 偵測後立即使用拭鏡紙（Kimwipe類）擦拭臺面。先取一張將上下臺面的液體吸走，再將此laboratory wipe吸過樣品的面反折到內部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。

2. 同一滴液體只能做一次偵測，欲重複定量同一樣品，請擦掉前一滴，重新取出一滴進行偵測。

3. 基本上核酸樣品可使用1~2ul做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不*過 2ul。並請使用2ul pipette避免體積不足導致液柱無法完整形成。唯蛋白質樣品因呈色劑與蛋白質本身特性，務必使用2ul進行偵測。

4. 當軟體跳出錯誤訊息時，請詳細閱讀並依指示進行障礙排除。常發生的情形是在偵測過程液柱並未正確形成，軟體會出現以下訊息?？上扔萌庋塾^察液柱是否未完整連接上下臺面，或樣品內有泡泡，將上臂拉起後，擦掉該滴樣品，再重新進行偵測，必要時可將樣品體積加大至2ul。



正確的液柱應為：



5. 不可使用含有Hydrofluoric Acid (HF)之樣品，其他無腐蝕性之液體皆可使用。



五、日常與定期維護：

1.平時保持臺面及儀器本身清潔。

2.定期校正。


常見問題：
問 1. 使用多少液體做測量？
答 1. 2ul，基本上可使用 0.5~2ul 做測量，隨各液體體積特性之不同會有不同體積需求，原則上不*過 2ul。並請使用2ul pipette 避免體積不足導致液柱無法完整形成。

問 2. 如何清潔臺座？
答2. 使用 laboratory wipe 將上下座的液體吸走，再將此 laboratory wipe 吸過樣品的面反折到內部，折疊四次後以單方向多次擦拭臺面（DNA 擦 5次，Protein 擦 20次）。點此觀看清潔臺座影片。


問3. 儀器多久需要校正？
答3. 每臺儀器出廠前皆經過多次測試，並附上測試報告。新機一年校正一次，之後建議每半年再進行一次校正。本公司備有一年兩次的校正合約，以原廠標準程序進行定期校正。若有特殊狀況亦可個案處理。

問4. 燈源多久需要更換？
答4.一般而言儀器內一個氙氣燈可偵測 350萬個樣品，依供電及實驗室環境會有些微差異。若儀器在初始化時反覆出現錯誤訊息，請進入Diagnostics內進行燈源強度確認，若看不見任何光譜，即為燈源壽終之訊息。

限制的免責聲明：本儀器僅限科研使用。 非IVD醫療用途。我司銷售皆為科研儀器，所售一切商品為非醫療器械。